活化的主要目的是去除色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)，包括殘留溶劑、水分和其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，從而保證固定相充分潤(rùn)濕，碳鏈?zhǔn)嬲箯氐?，使色譜柱達(dá)到最佳的工作狀態(tài)。此外，活化還能幫助恢復(fù)柱效，提升色譜柱的惰性，減少對(duì)樣品組分的非特異性吸附或化學(xué)反應(yīng)的可能性5。

2. 不同類型的色譜柱如何活化？

反相色譜柱

新的C18柱通常先用甲醇或乙腈沖洗20-30個(gè)柱體積。

接著使用甲醇/乙腈:水(50:50)沖洗10個(gè)柱體積。

最后用流動(dòng)相平衡10-30柱體積6。

正相色譜柱

新柱直接用流動(dòng)相平衡20-30個(gè)柱體積即可6。

離子交換色譜柱（如SAX, SCX）

新柱先用100%甲醇或乙腈沖洗20個(gè)柱體積。

然后轉(zhuǎn)換到流動(dòng)相進(jìn)行平衡6。

ShimNex HESAX/SCX以及WPSAX/SCX色譜柱

需要至少20倍柱體積的流動(dòng)相來(lái)平衡色譜柱。

當(dāng)流動(dòng)相中含有較高濃度的緩沖鹽時(shí)，為防止鹽析出，可先使用20%乙腈水溶液沖洗超過(guò)5倍柱體積作為緩沖，再過(guò)渡到流動(dòng)相。

因?yàn)镾CX色譜柱鍵合的是磺酸基團(tuán)，容易與醇類發(fā)生酯化反應(yīng)，因此應(yīng)避免在流動(dòng)相中使用醇1。

3. 活化過(guò)程中需要注意哪些事項(xiàng)？

在活化過(guò)程中，流速應(yīng)該從較低開始逐漸增加至正常工作流速。 實(shí)驗(yàn)室離心機(jī) 

對(duì)于長(zhǎng)期未使用的色譜柱或是經(jīng)過(guò)多次使用后性能下降的色譜柱，活化是一個(gè)恢復(fù)其初始分離效能的有效手段。

如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，則需注意先用水過(guò)渡，即每天分析前先用純水沖洗30分鐘以上，再用含緩沖鹽的流動(dòng)相平衡；分析結(jié)束時(shí)也需先用水沖洗去除緩沖鹽，最后再用甲醇沖洗保護(hù)柱子6。

4. 什么時(shí)候需要反沖色譜柱？

當(dāng)流動(dòng)相中長(zhǎng)時(shí)間使用了緩沖鹽或者等度高比例水相導(dǎo)致柱頭嚴(yán)重污染時(shí)，可能需要采取反沖措施。具體方法會(huì)根據(jù)不同的情況而有所不同，但一般涉及改變流動(dòng)相組成以增強(qiáng)清洗效果2。

通過(guò)遵循上述指導(dǎo)原則，可以有效地完成色譜柱的活化過(guò)程，并維持其良好的工作狀態(tài)。如果遇到特殊情況或特定型號(hào)的色譜柱，建議參照制造商提供的具體指南來(lái)進(jìn)行操作。